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細(xì)胞株的鑒定方法
當(dāng)獲得多個(gè)雜交瘤細(xì)胞株時(shí),要了解哪一株是適用的,則一定要通過(guò)各種鑒定。分析常見的方法有:
1、Ig類型測(cè)定
通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行測(cè)定,確定其Ig類型或Ig亞類型別。
2、特異性測(cè)定
把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免 疫學(xué)檢測(cè),鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。
3、抗體效價(jià)測(cè)定
效價(jià)以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示,稀釋度越高,則抗體效價(jià)也越高。在凝集反應(yīng)中,腹腔積液效價(jià)可達(dá)5萬(wàn)以上;在ELISA中,腹腔積液效價(jià)可達(dá)100萬(wàn)以上。如ELISA效價(jià)低于10萬(wàn),用于診斷測(cè)定將不會(huì)達(dá)到很高的敏感度,應(yīng)重新制備。
4、表位測(cè)定
通過(guò)雙向瓊脂擴(kuò)散法,把兩種McAb混合,加入于同一孔中,對(duì)孔放相應(yīng)的抗原,如出現(xiàn)兩條沉淀線可證明兩者為抗不同表位的McAb;利用ELISA雙抗夾心法,將一種McAb作包被抗體,另一作酶標(biāo)記,其中加入抗原,如顯色,則證明兩者抗不同的表位。
5、親和力測(cè)定
只有當(dāng)抗原與抗體結(jié)合部位結(jié)構(gòu)完全吻合時(shí),抗體的親和力。這種結(jié)合力以抗原抗體反應(yīng)平衡時(shí),抗原與抗體濃度的乘積與抗原抗體復(fù)合物濃度之比表示。如親和力太低,會(huì)嚴(yán)重影響測(cè)定的敏感性。
6、染色體分析
正常鼠的脾細(xì)胞染色體數(shù):40,全部為端著絲粒;小鼠骨髓瘤細(xì)胞染色體:SP2/0細(xì)胞為62—68,NS-1為54~64。大多數(shù)為非整倍性,有中部和亞中部著絲點(diǎn)。雜交瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目接近兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目的總和,在結(jié)構(gòu)上多數(shù)為端著絲粒染色體外.還應(yīng)出現(xiàn)少數(shù)標(biāo)志染色體。染色體數(shù)目多且較集中的雜交瘤細(xì)胞分泌高效價(jià)的抗體。